Introdução
Os quirópteros são um dos grupos de mamíferos mais diversificado do mundo, apresentando aproxi-madamente 1.460 espécies, e constituindo-se na segunda ordem em riqueza de espécies do Brasil, apenas superada pela ordem Rodentia[1][2][3]. Atualmente em nosso país, estão registradas nove famílias e 182 espécies[4], número esse que representa 21% do total de mamíferos conhecidos[3]. Os hábitos alimentares dos morcegos estão entre os mais diversificados no grupo de mamíferos, observando-se praticamente todos os grupos tróficos, com exceção dos saprófagos[1]. Além disso, eles habitam todos os biomas brasileiros e áreas urbanas[1]. Nas áreas preservadas, seus abrigos compreendem cavernas, tocas de pedras, ocos de árvores, árvores caídas, folhas, raízes na beira de rios e cupinzeiros[5][6][7]. Em áreas urbanas do território brasileiro, os morcegos já foram encontrados em pontes, forros de prédios e de casas de alvenaria, tubulação fluvial, pedreira abandonada, junta de dilatação de prédios, toldo de construções, interior de churrasqueiras e até mesmo em aparelhos de ar-condicionado[8]. O aumento da população de quirópteros nos centros urbanos está particularmente relacionado à falta de planejamento em relação à elaboração de projetos arquitetônicos e paisagísticos[9].
Os morcegos são de particular interesse em saúde pública por se localizarem em diferentes habitat, pela alta mobilidade e por se abrigarem também em ambientes domiciliares, aumentando a probabilidade de contato com o ser humano[10]. Alguns morcegos estão envolvidos na epidemiologia de doenças importantes como a raiva e a histoplasmose, que podem ser transmitidas à sociedade, direta ou indiretamente, assim como a outros animais homeotérmicos[11][12].
Os quirópteros também participam da cadeia epidemiológica de várias outras zoonoses: as virais, incluindo as arboviroses como febre amarela e encefalomielite equina; as bacterianas incluindo salmonelose, brucelose, shigelose e borreliose; as fúngicas criptococose e esporotricose; as riquetsioses e as transmitidas por protozoários como a leishmaniose e a malária[9].
A família Molossidae é composta por morcegos distribuídos em oito gêneros e 32 espécies[13]. Esses indivíduos têm ampla distribuição por todo território brasileiro e compõem uma parcela significativa da quiropterofauna, com implicações ecológicas, sociais, econômicas e sanitárias[14]. São animais sinantrópicos, frequentemente encontrados em áreas urbanas, com diversas espécies pertencentes a família Molossidae e maior registro de intrusão em residências de todos os municípios do estado de São Paulo[15]. São morcegos exclusivamente insetívoros que caçam sua presa em voo e possuem cauda longa e espessa que ultrapassa a borda distal do uropatágio[16].
Molossus molossus (Pallas, 1766) (Figura 1A) é um morcego de pequeno porte, com antebraço variando entre 38 e 42 mm, pesando de 13 a 15 g. A coloração da pelagem pode variar de castanho claro a chocolate ou enegrecida, possuindo ventre mais claro que o resto do corpo[14][16][17]. Costumam se abrigar principalmente em forros de casas ou prédios, fendas de dilatação, ocos de árvores, cavernas e debaixo de pontes, sendo fiéis ao abrigo escolhido[15]. Devido ao hábito alimentar insetívoro, que aumenta consideravelmente o potencial de parasitismo, e à sua natureza sinantrópica, Molossus molossus emerge como uma espécie de significativo interesse zoonótico. Isso se deve ao fato de que as interações entre parasito-hospedeiro em diversas espécies de morcegos ainda não estão bem esclarecidas. A diversidade e prevalência de agentes patogênicos potencialmente zoonóticos em uma população hospedeira é considerada um fator-chave no risco de aparecimento de novos agentes patogênicos em uma determinada região[18][19]. Os morcegos têm uma grande capacidade de dispersão e algumas espécies têm hábito migratório, oferecendo uma boa oportunidade para os patógenos se espalharem por longas distâncias[20][21], assim tornando relevantes os estudos epidemiológicos com animais silvestres de vida livre[22]. O presente estudo exibe informações sobre a prevalência de Eimeria sp. em indivíduos de Molossus molossus provenientes de municípios do estado de São Paulo.
Materiais e Métodos
Animais e procedência
Foram utilizados morcegos encaminhados para o laboratório de diagnóstico de raiva da Divisão de Vigilância de Zoonoses de São Paulo (DVZ/SP), provenientes dos seguintes municípios: Barueri, Campinas, Francisco Morato, Guarulhos, Itu, Jacareí, Jandira, Jundiaí, Piracicaba, São José dos Campos, São José do Rio Preto, São Paulo (capital), Santana do Parnaíba e Sorocaba.
Os animais foram encaminhados com suas respectivas fichas individuais, constando as seguintes informações: data, endereço (convertido a posteriori em coordenadas), tipo de coleta, condições de encontro, informações biológicas e informações dos possíveis abrigos. O mesmo procedimento foi realizado para os animais entregues pelos munícipes ou por outras instituições. Os animais mortos também foram incluídos, mesmo os que tenham sofrido congelamento prévio. Os critérios adotados para idade e sexo dos espécimes foram: adulto (AD); jovem (J); indeterminado (I); macho (M) e fêmea (F).
Coletas de amostras de tecidos e armazenamento
A necropsia dos morcegos foi realizada nos laboratórios da DVZ/SP. Foram retirados para análise os seguintes órgãos: coração, pulmão, rins, intestino, fígado, estômago, testículos, e útero, saco gestacional (quando encontrado), placenta e tecido muscular por apresentarem diversas granulações incomuns de coloração esbranquiçada (Figura 1 B-L). Além disso, fragmentos de tecido foram retirados com auxílio de uma pinça sob estereomicroscópio (40x), sendo armazenados imediatamente em formalina 3% e posteriormente encaminhados para análise. As amostras foram separadas e processadas no laboratório de zoonoses e doenças transmitidas por vetores da DVZ/SP e nas dependências do Instituto Resgatando o Verde (IRV) no município do Rio de Janeiro (RJ).
Foram preparadas lâminas com o tecido coletado de todos os morcegos que apresentaram numerosas granulações de coloração esbranquiçada, utilizando o método de coloração de Gram, com o objetivo de investigar a possível presença de bactérias. Paralelamente, as amostras foram inoculadas em meio de cultura: MacConkey a ٢٥ºC e ٣٧ºC para bactérias[23] e Sabouraud a ٢٥ºC e ٣٧ºC para fungos[24][25], além de lâminas histológicas montadas com fragmentos dos órgãos visando verificar a presença de endoparasitos. Os morcegos foram fixados em solução de formalina (formol 10%), conservados em álcool 70%, e posteriormente depositados na coleção da Divisão de Vigilância de Zoonoses da Prefeitura do Município de São Paulo (DVZ/SP) no setor do LabFauna.
Resultados
No período de 22 de setembro de 2021 a três de fevereiro de 2022 foram encaminhados para diagnóstico de raiva 1880 morcegos; desse total foram separados 729 morcegos da espécie Molossus molossus, oriundos de catorze municípios do estado de São Paulo. Desse total, 87 morcegos, sendo 48 machos e 39 fêmeas, apresentaram granulações incomuns de coloração esbranquiçada e foram separados para verificação do processo infeccioso (Tabela 1). Todos os morcegos examinados apresen-taram resultado negativo para raiva e histoplasmose.
Apenas três municípios apresentaram morcegos contaminados: Campinas, São José dos Campos e São Paulo (capital). Dos morcegos examinados, observou-se que Campinas registrou o maior percentual de animais com órgãos contaminados (25%), seguido pela capital, que apresentou 11,6% (Tabela 1).
A análise das lâminas de coloração de Gram e dos meios de culturas apresentaram resultados negativos para fungos e bactérias; porém na análise das lâminas histológicas verificou-se a presença do parasito Eimeria sp. (Filo Apicomplexa; Classe Rhyzopoda; Sub-classe Telosporidia; Ordem Coccidia; Família Eimeriidae) causador da doença parasitária Coccidiose (Figura 1 M-R).
A análise dos 1880 morcegos (Tabela 2) no geral revelou que Molossus molossus obteve destaque ao registrar maior número de encontros em situações atípicas. Esses animais têm uma tendência de proximidade com os seres humanos, uma vez que frequentemente são encontrados nos forros de residências, edifícios e fendas de dilatação[15]. Diante desse cenário, surgiu a necessidade de aprofundar o estudo desse grupo.
A análise revelou que a proporção de morcegos juvenis de M. molossus que foram parasitados superou a de adultos, representando 55,1% entre todos os morcegos examinados (Tabela 3). Observa-se também que houve uma predominância de parasitismo entre os machos.
Alguns órgãos apresentaram taxas mais elevadas de parasitismo, como fígado, estômago, intestino e rins. Entre 87 animais analisados, constatou-se que 86 estavam com o estômago acometido (98,8%), 85 tinham o intestino comprometido (97,7%), 80 apresentaram infecção nos rins (91,9%) e o fígado foi o órgão com maior taxa de parasitismo – todos os 87 morcegos (100%) analisados estavam parasitados (Tabela 4). Além disso, observou-se que todos os fetos encontrados estavam contaminados, atingindo uma taxa de 100% (Figura 1F).
Discussão e Conclusão
A DVZ recebe morcegos em situações atípicas da capital e de municípios do estado de São Paulo desde 1988, sendo que nessa época apenas era realizado o diagnóstico para raiva. Porém, a grande maioria dos morcegos capturados, mortos ou com nítidas debilidades, não apresentavam diagnóstico positivo para o vírus da raiva (menos de 1%8). Em 2021, começou-se a investigar, através de necropsia, alguma alteração visível que pudesse explicar as mortes desses morcegos. Com a identificação do microrganismo nas amostras recebidas pela DVZ é possível sugerir que o parasi-tismo por Coccidiose pode trazer danos irreversíveis a saúde dos animais contaminados, principalmente nas espécies sinantrópicas. Isso aponta um fator preocupante, podendo ser a possível causa para a morte dos morcegos, tendo em vista que eles apresentavam contaminação pelo parasito em grande parte, se não total, de sua cavidade visceral.
A família Molossidae é a mais comum em grandes centros urbanos, incluindo a cidade de São Paulo, sendo que 29% das 43 espécies registradas no município são da espécie M. molossus[8]. O período em que foi realizado este estudo coincide com a época de reprodução da espécie, resultando em um aumento das reclamações e capturas realizadas pela DVZ/SP de espécimes que se encontram em situações atípicas. A maioria desses casos envolve filhotes e jovens morcegos que caem dos forros durante seus primeiros voos. Essa circunstância pode explicar por que a porcentagem de morcegos jovens parasitados é maior do que a de adultos. Embora não existam outros estudos publicados sobre quirópteros para fazer comparações diretas em relação à suscetibilidade dos jovens, é relevante mencionar que pesquisas[26][27] com bezerros relatam que a maioria dos animais parasitados eram jovens, independentemente do sexo. Foi verificado que os morcegos infectados foram provenientes de áreas com densa população humana, e sabe-se que em áreas mais antropizadas os endoparasitas têm maior prevalência em pequenos mamíferos[28][29], além das mudanças ambientais que possuem uma notável influência no aparecimento de algumas doenças parasitárias zoonóticas[30].
A Coccidiose ou Eimeriose é uma doença causada por protozoários do gênero Eimeria[26][27] e pode desencadear alterações metabólicas bruscas em seus hospedeiros, como a má absorção dos alimentos ingeridos e úlceras. A propagação dessa doença se faz através das fezes dos animais infectados, que contaminam os alimentos e a água afetando principalmente a parede intestinal, o estômago, os fígados e os rins – em alguns casos o epitélio e endotélio dos morcegos também[31][32][33][34].
Os hospedeiros acometidos por Eimeria sp. possuem grande parte de seus aparelhos gastroin-testinais contaminados. É possível verificar essa contaminação a partir das nítidas granulações[35] e diversas granulações brancas relatadas na superfície renal de alguns morcegos[36]. Os resultados deste estudo corroboram as observações de Miglionico[35] e Gruber et al.[36], pois essas mesmas características foram observadas na maioria dos morcegos analisados, apresentando tais alterações nos sistemas digestivo e renal, principalmente estômagos, intestinos e rins.
Os trabalhos de Duszynski[37][38][32][33][34] relatam que os oocistos são eliminados nas fezes dos morcegos e o próximo hospedeiro pode ser contaminado se o ingerir. Esse autor também destaca a possibilidade de oocistos ficarem retidos nas asas dos insetos, o que, por sua vez, pode facilitar a disseminação do parasita entre os morcegos insetívoros. O mesmo autor ressalta a importância da necessidade de estudos adicionais para confirmar essa hipótese. No caso dos Molossus molossus, devido ao hábito alimentar insetívoro, é plausível que tenham adquirido a contaminação parasitária por meio da predação de insetos e, consequentemente, pela ingestão dos oocistos.
Na cidade de Manaus/AM, Lainson[39] menciona a existência de oocistos de Eimeria molossi nas fezes de Molossus ater = Molossus rufus (É. Geoffroy, 1805).
Morcegos que habitam colônias com micro-clima estável, podem ser mais propensos a ingerir oocistos esporulados[39][32][33]. Tais características coincidem com o hábito dos Molossus molossus, que formam grandes colônias em locais com este tipo de microclima, potencializando assim a contaminação parasitológica em relação às espécies de morcegos que não possuem o hábito de vida gregária.
Estudos mais intensos para compreensão da extensão da contaminação por Coccidiose em morcegos no estado de São Paulo, principalmente no município de Campinas, são fundamentais, uma vez que os danos causados por essa patologia podem ocasionar resultados que afetem diretamente a população de morcegos insetívoros urbanos, podendo provocar um desequilíbrio ecológico.
Destacamos a necessidade da realização de pesquisas adicionais para determinar se a presença de Eimeria sp. em quirópteros pode representar alguma importância epidemiológica deste protozoário como um agente etiológico em área urbana. Tal sugestão leva em conta todas as características ecológicas dos molossídeos, principalmente a proximidade com áreas antrópicas, o que aumenta a probabilidade do contato com seres humanos, animais domésticos e fezes contaminadas com oocistos esporulados de Eimeria sp., além do fato de os estudos relacionados a protozoários da família Eimeriidae em morcegos serem escassos.
Agradecimentos
Ao Centro de Controle de Zoonoses de São Paulo – Divisão de Vigilância de Zoonoses São Paulo; ao setor de quirópteros por disponibilizar os morcegos para o estudo; ao Instituto Resgatando o Verde, por disponibilizar a sede para análises do material; e aos biólogos Bruno Pereira e a Marilia C. Brasil-Sato, pelo auxílio na identificação do parasito.
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